什么是T-SPOT.TB检查

栏目:美眉资讯 来源:互联网 编辑:Admin 时间:2020-11-17 09:20:19


【据《Acta Derm Venereol》,2018年11月报道】题:T-SPOT.TB在皮肤分枝杆菌感染中诊断价值研究(作者Chen Y等)

γ干扰素释放实验是一种常用于潜伏结核诊断的检测方法,它以多数环境分枝杆菌及BCG分枝杆菌缺失的RD1区编码抗原(ESAT-6,CFP-10)为底物,相对于结核菌素皮肤实验更具特异性。然而相同抗原的编码序列和氨基酸序列在海鱼分枝杆菌、苏尔佳分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、戈登分枝杆菌及结核分枝杆菌之间具有同源性,对于多种非结核分枝杆菌(NTM)感染亦有辅助诊断价值。本研究前瞻性研究了一种代表性的γ干扰素释放实验T-SPOT.TB的在结核等含RD1区分枝杆菌皮肤感染中的诊断价值,并评估在抗菌治疗前后该实验结果的变化情况。

T-SPOT.TB由英国牛津大学研发,检测受试者是否存在结核分枝杆菌感染的体外诊断试剂。采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)定量检测患者血液或体液标本中结核效应T细胞数,根据阳性细胞数(即显色的斑点数)来判断患者结核分枝杆菌感染状态,辅助临床诊断和排筛结核。

临床意义及预期用途

结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主,作为免疫应答的一部分,T细胞受结核抗原刺激致敏,形成活化的效应T细胞,包括CD4和CD8,从全血中单独被分离出来,在体外受特异抗原刺激并被计数。从结核分枝杆菌复合群(人型、牛型、非洲型)中选择有用的抗原降低与BCG(卡介苗)和环境分枝杆菌的交叉反应提高特异性。两个单独的抗原模仿ESAT-6和CFP 10,联合应用提高检测灵敏度。

本产品用于检测并计数人新鲜外周静脉抗凝全血中的结核特异抗原刺激活化的效应T细胞。该产品用于检测人外周抗凝全血中的结核特异抗原刺激活化的效应T细胞,仅适用于临床疑似结核病的辅助诊断。

T-SPOT.TB是一种更简单的酶联免疫斑点(ELISPOT)检测方法。ELISPOT检测是高灵敏度的,在细胞分泌的细胞因子扩散稀释前,其能够立即捕获细胞周围所分泌的细胞因子。这使得ELISPOT检测更加的灵敏,超过传统的ELISA实验。T-SPOT.TB被设计出来用于检测结核特异抗原刺激活化的效应T细胞。T-SPOT.TB计数每个活化的结核特异效应T细胞。

原理及参数

干扰素-γ对于细胞内病原体(例如结核分枝杆菌)的免疫防御至关重要。 感染后,幼稚T细胞开始对TB特异性抗原敏感,发展成TB特异性效应T细胞(CD4 +和CD8 +),然后游走到感染部位并分泌干扰素-γ,以激活巨噬细胞吞噬和破坏分枝杆菌。 感染TB的患者的外周血中有TB特异性的效应T细胞,当被T-SPOT.TB的抗原(ESAT-6,CFP-10)刺激时,它们会在体外分泌干扰素-γ。T-SPOT.TB检测直接捕获单个TB特异性效应T细胞分泌的干扰素-γ。每一个斑点代表一个分泌细胞因子的T细胞,计数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的T细胞数量。

产品名称及组成:

结核感染T细胞检测试剂盒(免疫斑点法),T-SPOT.TB24人份/盒。

微孔培养板(96孔),结核杆菌特异混合多肽A(2瓶),结核杆菌特异混合多肽B(2瓶),阳性质控(2瓶),浓缩标记抗体(1管),显色底物溶液(1瓶),CD光盘(1张)。

样本要求:免疫力正常的患者,根据以下标准从静脉血样本中获得足够数量的外周血单个核细胞(PBMCs)用于实验。

·成年人或10岁以上儿童:8mL静脉血 

·2-9岁儿童:4mL静脉血 

·2岁以下儿童:2mL静脉血

实验室表现:

美国FDA数据:特异性97.1%(297/306),灵敏度95.6%(175/183);

国内CFDA数据:特异性94.1%(478/508),灵敏度95.3%(624/655)。

基本不受免疫力状况影响

在实验过程中尽可能去除干扰因素,包括:

细胞洗涤,去除血液内源性干扰因素,避免本底影响结果准确性;

细胞计数,保证足量细胞参与反应,提高免疫力异常人群检测的准确性。

BCG接种人群的结核感染首选(美国CDC指南推荐)

相对于传统的PPD、痰涂片和培养,T-SPOT.TB可以免于BCG接种和绝大多数环境分枝杆菌影响造成的假阳性,给出准确的诊断。

诊疗指南推荐

写入国内外30多个结核感染检测指南;

γ-干扰素释放实验在中国应用的建议(2014);

HIV合并结核分枝杆菌感染诊治专家共识(2017)

500+篇研究文献,提供更多临床证据

大多数实验室通常可以在收到样本后36-48小时内报告结果。

综上, T-SPOT.TB 在诊断结核方面具有良好的敏感性和特异性, 在鉴别活动性结核和潜伏性结核、预测结核发病风险方面也具有一定意义,已被越来越多的国家认可并应用于临床诊断。基于结核抗原特异性T 细胞向病变部位集中的特点, T-SPOT.TB技术的检测物已不仅局限于静脉血, 支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。

 

 

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